Практикум: Микроскопическое изучение живых (нативных) и окрашенных микробов.
Микроскопический метод в микробиологии. Методические основы.
Микроскопия в световом оптическом микроскопе.
Световой микроскоп состоит из механической и оптической части. Механическая часть микроскопа - это штатив, состоящий из основания и колонки, к которой прикреплены тубус и предметный столик. В колонке имеются две винтовые системы для установки тубуса. Оптическая часть микроскопа состоит из осветительного аппарата, объективов и окуляров. Осветительный аппарат расположен под предметным столиком. В большинстве микроскопов свет отражается от зеркала и, пройдя через линзы конденсора, фокусируется в плоскости препарата. В современных микроскопах освещение достигается с помощью вмонтированного в микроскоп источника света. Объективы представляют собой систему линз в металлической оправе. Передняя (фронтальная) линза - самая маленькая. От нее главным образом зависит увеличение микроскопа. Расположенные за ней линзы называются коррекционными, так как они предназначены для устранения недостатков оптического изображения. При микроскопии объектив погружают в каплю масла, поэтому объектив называют иммерсионным объективом (лат. immercio - погружение), а масло - иммерсионным маслом. Иммерсионный объектив требует особо осторожного обращения. Фронтальная линза имеет настолько короткое фокусное расстояние до исследуемого объекта, что опускать объектив нужно медленно, глядя сбоку, чтобы не раздавить препарат, что связано с порчей линзы. Окуляры имеют две линзы: верхняя называется глазной, а нижняя - собирательной. Окуляры обозначают по тому увеличению, которое они дают, например: х7, х10, х15 и т.д. Предел разрешения оптического микроскопа равен 0,2 мкм.
Окраска микроорганизмов - комплекс методов изучения структуры и морфологии микроорганизмов при микроскопии препаратов, приготовленных из чистых культур или исследуемого материала.
Фиксированные бактерии окрашиваются лучше живых, так как клеточная стенка и цитоплазматическая мембрана живой клетки ограничивают проникновение в нее красителя.
Приготовление окрашенного препарата включает ряд этапов:
1) приготовление мазка;
2) высушивание мазка;
3) фиксацию мазка;
4) окраску;
5) высушивание.
Мазок готовят на чистых предметных стеклах, на середину которых наносят небольшую каплю воды и в нее с помощью бактериологической петли помещают исследуемый материал. Материал распределяют на стекле равномерным тонким слоем, размер мазка -1-2 см 2 .
Препарат обычно высушивают при комнатной температуре на воздухе. Для ускорения высушивания допускается подогревание мазка в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки.
Высушенный мазок подвергается фиксации, при которой мазок прикрепляется к стеклу (фиксируется), а микробы становятся более восприимчивыми к окраске. Способов фиксации много. Наиболее простой и распространенный - фиксация жаром - нагревание на пламени горелки (препарат проводят несколько раз через наиболее горячую часть пламени горелки). В ряде случаев прибегают к фиксации жидкостями (этиловый или метиловый спирт, ацетон, смесь равных объемов спирта и эфира - по Никифорову).
После фиксации мазок окрашивают. Количество краски, наносимое на препарат, должно быть таким, чтобы покрыть всю поверхность мазка. По истечении срока окрашивания (2-5 мин.) краску сливают и препарат промывают водой.
Существуют простые, сложные и дифференциальные способы окрашивания микробов. При простой окраске обычно употребляют одну краску, чаще всего красную - фуксин, или синюю - метиленовый синий. Фуксин красит быстрее (1-2 мин.), метиленовый синий - медленнее (3-5 мин.). Фуксин приготовляют в виде концентрированного карболового раствора (фуксин Циля), очень стойкого и пригодного для окраски в течение многих месяцев. Метиленовый синий приготовляется заранее в насыщенном спиртовом растворе, который стоек и может долго храниться.
Основные виды красителей, которые применяются в микробиологической практике:
Сложные способы окраски, при которых применяются два или более красителя, являются ценными методами, используемыми в микробиологической диагностике инфекционных болезней.
Механизм и этапы окраски по Граму
1. На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового. Через 1 минуту экспозиции перейти к п.2.
2. Нанести раствор Люголя на 1-2 мин (йод).
3. Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 сек. до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.
4. Возможно дополнительно промыть мазок водой.
5. Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 мин,
6. Промыть водой, высушить и микроскопировать.
Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный.
Вопрос 5. Простые и сложные методы окраски. Подразделение сложных методов окраски по назначению. Протравы и дифференцирующие вещества. Метод Грама: сущность, этапы окраски, практическое применение.
Ответ: Простой метод окраски является одноэтапным (1 краситель –анилиновые, фуксин, генцианвиолет, метиленовый синий в виде растворов или пропитанных бумажек). Окраска 3-5 минут, промывание, высушивание, микроскопия. Можно получить представление о форме, размерах, расположении (но не о деталях строения).
Сложные
Дифференциальные - позволяющие отличить один вид или группу бактерий от других (по Грамму – характер клеточной стенки, метод Циля-Нильсена - кислотоустойчивые).
Протравы - химические и физические вещества, повышающие окрашиваемость микроорганизмов. Уплотняют цитоплазму и делают окраску более прочной, либо разрыхляют клеточную стенку и способствуют проникновению краски в клетку (раствор Люголя в методе Грама, карболовая кислота в методе Циля-Нильсена)
Дифференцирующие вещества избирательно обесцвечивают одни виды или структуры бактериальных клеток и не обесцвечивают другие
(спирт в методе Грама, серная кислота в методе Циля-Нильсена и Ожешко).
Окраска по Грамму.
|
цель метода |
Выявление грамположительных и грамотрицательных бактерий |
|
основной краситель |
карболовый раствор генцианвиолета |
|
протрава |
раствор Люголя (после окрашивания) |
|
дифференцирующее вещество | |
|
дополнительный краситель |
разбавленный карболовый раствор фуксина |
|
в пламени спиртовки до окрашивания |
|
|
этапы окраски |
Окрасить раствором генцианвиолета 1 мин. (или с бумажкой – 3 мин.); Нанести на мазок раствор Люголя – 1 мин.; Промыть в этаноле 30 сек.; Промыть водой; Окрасить раствором фуксина 1 мин. (или с бумажкой – 5 мин.); Промыть водой; Высушить |
|
сущность метода |
Генцианвиолет образует комплекс с тейхоевыми кислотами в присутствии Люголя, который задерживается многослойным пептидогликаном у грамположительных бактерий. При дополнительной окраске фуксином грамотрицательные бактерии приобретают красный цвет. |
Вопрос 6. Сложные методы окраски, протравы и дифференцирующие вещества. Метод Циля-Нильсена: сущность, этапы окраски, практическое применение.
Ответ: Сложные методы многоэтапные, различные красители, протравы, дифференцирующие вещества. Сложные методы бывают:
Дифференциальные (отличить группы (по Грамму - характер клеточной стенки, метод Циля-Нильсена -кислотоустойчивые).
Предназначенные для выявления различных структур (споры- Ожешки, включения волютина-Нейссера, капсула- Бурри-Гинса).
Протравы - химические и физические вещества, повышающие окрашиваемость микроорганизмов. Уплотняют цитоплазму и делают
окраску более прочной, либо разрыхляют клеточную стенку и способствуют проникновению краски в клетку (раствор Люголя в методе Грама, карболовая кислота в методе Циля-Нильсена)
Дифференцирующие вещества - вещества избирательно обесцвечивают одни виды или структуры бактериальных клеток и не обесцвечивают другие (спирт в методе Грама, серная кислота в методе Циля-Нильсена и Ожешко).
Метод Циля-Нильсона:
|
цель метода |
Выявление кислотоустойчивых и некислотоустойчивых бактерий |
|
основной краситель |
карболовый раствор фуксина |
|
протрава |
карболовая кислота (в момент окрашивания) |
|
дифференцирующее вещество |
серная кислота |
|
дополнительный краситель |
водный раствор метиленового синего |
|
способ фиксации препарата-мазка |
в пламени спиртовки в процессе окраски |
|
этапы окраски |
Окрашивать карболовым раствором фуксина (фуксин Циля) через фильтровальную бумажку при осторожном нагревании над пламенем спиртовки 3 раза до появления паров белого цвета (1); Промыть в 5% серной кислоте; Промыть водой; Окрасить раствором метиленового синего 1 мин.; Промыть водой; Высушить |
|
сущность метода |
При частичном гидролизе клеточной стенки фуксин взаимодействует с миколовыми кислотами и образует комплекс в присутствии фенола. Фенол разрыхляет бактериальную оболочку и краска проникает внутрь клетки. Кислотоустойчивые -красные, некислотоустойчивые - синие |
Практическое применение : для диагностики заболеваний (туберкулез)
Вопрос 7. Клеточная стенка бактерий: особенности строения у грамположительных и грамотрицательных бактерий, функции, методы выявления. Особенности строения клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий. L -формы бактерий.
Ответ:
Клеточная стенка. Располагается над ЦПМ.
КС обеспечивает постоянную форму клетки, механическую и осмотическую защиту, взаимосвязь с окружающей средой, несет рецепторы для бактериофагов.
Отдельные соединения в составе КС обладают целым спектром иммунобиологических свойств : участвуют в адгезии, угнетении фагоцитоза, обладают иммуномодулирующей активностью и т.д.
Химический состав и строение клеточной стенки постоянны и являются важным таксономическим признаком.
В зависимости от строения клеточной стенки прокариоты, относящиеся к эубактериям, делятся на две большие группы: грамположительные и грамотрицательные бактерии.
Основа -пептидогликан , обеспечивающий ригидность и эластичность КС.
Структура: N-ацетилглюкозамина и N-ацетилмурамовой кислоты, соединенных между собой посредством гликозидных связей.
К каждому остатку N-ацетилмурамовой кислоты присоединен короткий пептид из 4-5 аминокислот.
Две особенности пептидного хвоста заслуживают внимания: наличие аминокислот в D-форме (неприродная конфигурация) и высокое содержание аминокислот с двумя аминогруппами. Это имеет принципиальное значение для пространственной организации пептидогликана. Обе аминогруппы этих аминокислот могут участвовать в образовании пептидных связей.
У грамположительных эубактерий он составляет основную массу вещества клеточной стенки (от 40 до 90%), у грамотрицательных - содержание пептидогликана значительно меньше (1-10%).
Функции клеточной стенки:
Обусловливает форму клетки.
Защищает клетку от механических повреждений извне и выдерживает значительное внутреннее давление.
Обладает свойством полупроницаемости, поэтому через нее избирательно проникают из среды питательные вещества.
Несет на своей поверхности рецепторы для бактериофагов и различных химических веществ.
Особенности строения КС Гр+
Клеточная стенка грамположительных бактерий достаточно плотно прилегает к ЦПМ.
Пептидные сшивки в пептидогликане обеспечивают его трехмерную пространственную организацию.
Многослойный пептидогликан пронизывают тейхоевые кислоты – полифосфатные соединения на основе рибитола или глицерина.
Тейхоевые кислоты ковалентно могут соединяться с N-ацетилмурамовой кислотой (собственно тейхоевые или стеночные) или с гликолипидом ЦПМ (липотейхоевые).
Свободные гидроксилы фосфорной кислоты придают тейхоевой кислоте свойства полианиона, определяющего поверхностный заряд клетки.
Особенности строения КС Гр-
Пептидогликан образует только тонкий внутренний слой клеточной стенки, неплотно прилегающий к ЦПМ.
У большинства видов пептидогликан образует одно- или двухслойную структуру, характеризующуюся весьма редкими поперечными связями между гетерополимерными цепями.
Снаружи от пептидогликана располагается дополнительный слой клеточной стенки - наружная мембрана. Она состоит из фосфолипидов, типичных для элементарных мембран, белков, липопротеина и липополисахарида (ЛПС).
ЛПС сложного молекулярного строения, занимает около 30-40% поверхности наружной мембраны и является ее важнейшим компонентом.
Методом выявления клеточной стенки является метод Пешкова (КС –красная; цитоплазма –розовая), по Грамму-тип стоения клеточной стенки.
Метод выявления клеточной стенки: Метод Пешкова
Этапы окраски :
1.мазок протравливать в 10% растворе танина 6-8 мин
2.промыть водой
3.окрашивать водным раствором фуксина 30-60 сек
4.высушить
Сущность метода : танин уплотняет клеточную стенку бактерий, и большая часть фуксина задерживается в ней
Цель : выявление клеточной стенки. КС - красная, цитоплазма -розовая
Особенности клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий
Клеточная стенка кислотоустойчивых бактерий содержит большое количество липидов и восков, делающих их устойчивыми к последующему после окрашивания обесцвечиванию кислотами, щелочами или этанолом (например, виды Mycobacterium или Nocardia). Для их окраски применяют метод Циля-Нильсена .
L-формы
Если бактерии частично или полностью утратили клеточную стенку, но сохранили способность к размножению, они называются L-формами.
L-формы бактерий образуются под воздействием препаратов, ингибирующих синтез пептидогликана (антибиотик пенициллин) или разрушающих пептидогликан (лизоцим).
Изучают L-формы в фазово-контрастном микроскопе
Воспрос 8. Капсула бактерий: химическая природа, строение, функции, значение. Методы выявления капсул. Примеры инкапсулированных бактерий.
Капсула бактерий располагается поверх клеточной стенки. Она защищает бактериальную клетку во внешней среде от механического повреждения, высыхания, ядовитых веществ, бактериофагов, фагоцитов(в инфицированном организме). Выявление: в мазках-отпечатках из органов зараженных животных(простой метод, метод Грама). Тела бактерий окрашены на фоне окрасившейся ткани органа,окружены белым ореолом капсулы(капсула не окрашивается). Метод Бурри-Гинса (для окраски чистой культуры капсульных бактерий).
Метод выявления капсул: метод Бурри-Гинса
Цель метода : выявление капсулы у бактерий
Этапы окраски :
1.в каплю туши добавить каплю жидкости с микроорганизмами и растереть тонким слоем как мазок крови
2.высушить и зафиксировать в пламени горелки
3.окрасить карболовым фуксином 1мин
4.высушить
Сущность метода : капсула не окрашивается, задерживает тушь на поверхности, а фуксин окрашивает бактериальную клетку
Пример инкапсулированных бактерий : Klebsiella pneumoniae , Bacillus cereus
Воспрос 9. Жгутики у бактерий: строение, типы расположения, функции, способы выявления. Ворсинки: фимбрии, пили, подразделение, строение, функции. Примеры бактерий.
Жгутики являются органами движениями, представляют собой нитевидные придатки,состоят из белка флагеллина; прикрепляется к бакт.клетке с помощью базального тельца(система дисков и крючка, к которому прикреплена жгутиковая нить). Монотрихи (один жгутик),перитрихи (жгутики по всей поверхности бакт клетки), лофотрихи (пучок жгутиков на одном конце клетки), амфитрихи (единичные жгутики или пучки на разных полюсах клетки). Способы выявления: метод серебрения(жгутики искусственно утолщаются и становятся видимыми в иммерсионном микроскопе); наличие жгутиков определяется по активной подвижности микробных клеток.
Ворсинки(фимбрии и пили) состоят из белка пилина, видны только в электронном микросопе(тонкие и короткие). F -пили (половые, обеспечивают конъюгацию междубактериями);фимбрии общего порядка (адгезия).
Примеры бактерий: Половые пили Е. соli
Salmonella Typhi - перитрихи
Vibrio cholerae - монотрихи
Campylobacter jejuni - лофотрихи или амфитрихи
Воспрос 10. Споры бактерий: типы расположения спор в клетке, строение споры. Причины устойчивости спор к воздействию факторов внешней среды. Методы выявления спор. Примеры спорообразующих бактерий.
Эндоспора- являются приспособлением бактерий для сохранения вида в неблагоприятных условиях внешней среды. В одной бактериальной клетке образуется только одна спора! Такой способностью обладают бактерии рода Bacillus и Clostridium . (Bacillus – центральное расположение спор, не превышают поперечник клетки; Clostridium-крупные споры, субтерминально/терминально,в месте нахождения споры клетка раздувается, приобретая веретенообразную форму).Высокая резистентность ,причины: низкое содержание свободной воды, высокое содержание кальция,наличие дипиколиновой кислоты и белка, богатого цистеином,наличие нескольких оболочек). Окрашивание спор-метод Ожешки.(на высушенный мазок наложить фильтовальную бумажку, налить 0,5% раствор соляной кислоты и нагревать над пламенем спиртовки до появления пара 3 раза;далее окрашивать по Цилю- Нильсену.(Вегетативные клетки в готовом мазке-голубого цвета,споры-рубиново-красные).
Воспрос 11. Ультраструктура бактериальной клетки. Строение цитоплазматической мембраны, функции, методы выявления. Особенности строения наружной мембраны грамотрицательных бактерий.
ЦМП-основной барьер,который ограничивает протопласт бактерий,выявляется только в электронном микроскопе;состоит из двойного слоя фосфолипидов,куда включены интегральные и неинтегральные белки;от мембраны эукариот отличается отсутствием стеролов.
Функции : участвует в процессах избирательного активного транспорта молекул из внешней среды, является осмотическим барьером и осмотическим мостиком, выделяет гидролитические ферменты, в ее состав входят ферменты электрнонно-транспортной цепи,с ней связана АТФ-аза, содержит ферменты комплекса репликации ДНК нуклеоида,в ней фиксируются жгутики и ворсинки,имеет ферментный аппарат,участвующий в синтезе своих собственных структур, клеточной стенки.
Мезосомы - инвагинации ЦПМ внутрь клетки. Играют роль в репликации хромосомы и ее последующем расхождении по дочерним клеткам, разграничивает внутреннее содержимое на отсеки. Мезосомы грамотрицательных бактерий-простые инвагинации, грамположительных имеют сложную морфологию (везикулярные,трубчатые,пластинчатые).
Наружная мембрана грамотрицательных бактерий связана посредством липопротеина с подлежащим тонким слоем пептидогликана; внутренний компонент-фосфолипидный бислой, в наружном расположен липополисахарид (является О-антигеном, состоит из: липида А-консервативная структура; ядра, или стержневой, коровой части-олигосахаридная структура; высоковариабельного О-специфического олигосахарида). Белки- порины пронизывают мембрану, образуя гидрофильные поры, также являются рецепторами для бактериофагов.(из учебника)
Воспрос 12. Ультраструктура бактериальной клетки. Рибосомы: строение рибосом у прокариот, функции. Отличия в строении рибосом эукариотических клеток. Цитоплазматические включения у бактерий: химическая природа, функции, способы выявления, значение.
Рибосомы прокариот имеют константу седиментации 70 S. Они построены из двух частиц: 30 S (малая субъединица) и 50 S (большая субъединица). S - это коэффициент седиментации, который характеризует скорость перемещения молекул или частиц в центробежном поле при центрифугировании. Рибосомы рассеяны по всей цитоплазме
В клетке эукариот имеют 80S рибосомы прикреплены к эндоплазматическому ретикулуму. Функция: синтез белков
Включения- зерна волютина,содержащие поли- и мета-фосфаты. (Corynebacterium diphtheria). Окрашиваются простым методом Леффлера(окраска фиксированного в пламени горелки мазка щелочным мителеновым синим 5 мин. Тела бактерий-голубые,зерна волютина- темно-синие ) и сложным методом Нейссера (фиксированный в пламени горелки мазок окрашивают уксусно-кислой синькой в течении 1 минуты,промывают водой,протравливают раствором Люголя 30 скекунд и докрашивают везувином. Препарат промывают водой, высушивают, микроскопируют. Тела бактерий-желтые , зерна волютина- темно-синий цвет , расположены на обоих концах клетки) .
Воспрос 13. Ультраструктура бактериальной клетки. Нуклеоид бактерий: строение, функции и методы выявления. Особенности организации генетического аппарата прокариот и эукариот.
Нуклеоид у прокариот - генетический аппарат бактерий не имеет ядерной оболочки и представлен одной кольцевой двунитевой суперспирализованной молекулой ДНК,которая является хромосомой; располагается в цитоплазме,не содержит белков гистонов. Не способен к митозу
Генетический аппарат всех эукариот находится в ядре и защищён ядерной оболочкой.ДНК эукариот линейная. Хромосомы как структуры. Содержит белки-гистоны. Способен к митозу
Выявляют при электронной микроскопии, Романовского- Гимзы.
метод Романовского-Гимзы
Цель метода : выявление нуклеоида; нуклеоид - сине-фиолетовый; цитоплазма - розовая
Сущность метода : Амур и метиленовый синий окрашивает участки клетки со слабощелочным pH , эозин с кислым
Этапы окраски :
1.провести кислотный гидролиз в растворе соляной кислоты при нагревании
2.промыть водой
3.окрашивать краской Романовского-Гимзы 40-60 мин
4.высушить
14. Актиномицеты : морфология чистой культуры и структура друзы актиномицетов. Методы изучения. Роль в инфекционной патологии человека.
Актиномицеты - группа нитчатых грамположительных прокариот. Виды актиномицет представляют собой тонкие неспорообразующие полиморфные палочки и нити(гифы) с ветвлением; гифы переплетаясь, образуют мицелий.
Актиномицет у здорового человека обитают в полости рта и кишечном тракте, не причиняя ему вреда, но снижение иммунитета организма может вызвать заболевание - актиномикоз (развиваются гнойные хронические процессы с поражением любых органов и тканей).
В пораженном организме актиномицеты образуют друзы , имеющие звездчатую, лучистую форму. Центр друзы состоит из компактного кальцинированного плотного мицелия, а периферийные гифы покрыты капсулоподобными эозинофильными чехлами, выполняющими защитную функцию.
Для изучения актиномицет применяют методы Грама и Циля-Нильсена
15. Микоплазмы : таксономия, строение клетки, особенности морфологии, биологические свойства, методы культивирования и выявления. Роль в инфекционной патологии человека.
Ответ : Класс - Mollicutes
Порядок - Mycoplasmatales
Семейство - Mycoplasmataceae
Род - Mycoplasma
Микоплазмы - полиморфные микроорганизмы, отличающиеся от других прокариотов отсутствием клеточной стенки
Поверхностной оболочкой микоплазм является цитоплазматическая мембрана, более прочная и эластичная (т.к. в ней присутствует холестерин). Клетки микоплазм содержат нуклеоид(самый маленький), рибосомы, цитоплазму и цпм (без мезосом). У некоторых микоплазм обнаружены микроворсинки (Mycoplasma pneumoniae) и нитчатые выросты различной длины, которые принимают участие в скользящем движении клеток и адгезии.
Для культивирования микоплазм используют специальные полужидкие среды , на которых через 2-4 недели получают видимый рост в виде колоний, напоминающий "яичницу- глазунью"(из-за хрупкости микоплазм - т.к. Отсутствует клеточная стенка).Их изучают в нативных препаратах в фазово-контрастном микроскопе (не удается окрасить из-за хрупкости)
16. Риккетсии : таксономия, биологические свойства, морфологические формы, методы окраски, методы культивирования. Жизненный цикл риккетсий. Роль риккетсий в патологии человека (назовите заболевания и соответствующих им возбудителей).
Ответ : Царство - Bacteria
Порядок - Rickettsiales
Семейство - Rickettsiaceae
Род - Rickettsia
Риккетсии - грамотрицательные полиморфные бактериоподобные прокариоты,капсул,спор не образуют. Облигатные внутриклеточные бактерии, которые не растут на простых питательных средах. Жизненный цикл риккетсий включет 2 стадии - вегетативную и покоящуюся . В вегетативной стадии риккетсии активно размножаются путем бинарного деления; покоящаяся форма обладает повышенной резистентностью(меньших размеров, с утолщенной клеточной стенкой).
Различают 4 морфологические формы риккетсий (по Здродовскому ) :
Кокковидную (d= 0,3-0,4мкм)
Палочкивидную (1-2 мкм)
Бациллярную(3-5 мкм)
Нитевидную(до 40 мкм)
Риккетсии культивируются в желточных мешках куриных эмбрионов, перевиваемых культурах клеток, легких белых мышей. Риккетсии можно культивировать путем инфицирования ими переносчиков возбудителей инфекций - вшей, блох, клещей. Для окраски риккетсий применяют сложные методы - Романовского-Гимзы и Здродовкого
Методика окраски :
1.фиксированный в пламени горелки мазок окрашивают разведенным карболовым фуксином Циля(без нагревания)
2.промывают водой
3.обесцвечивают слабым раствором органической 0,5% лимонной к-ты, 0,15% уксусной к-ты или минеральной кислоты (0,01% HCL)
4.промывают водой и докрашивают водным раствором метиленового синего
Результат окраски : риккетсии - в рубиново-красный; цитоплазма - голубая; ядро - синее
Патогенные для человека риккетсии являются возбудители риккетсиозов, для которых характерны сыпнотифозные или пятнистые лихорадки. Например, Rickettsia prowazekii вызывает эпидемический вшивый сыпной тиф.
17. Хламидии : таксономия, морфология и ультраструктура, жизненный цикл. Методы выявления и культивирования. Роль в инфекционной патологии человека.
Ответ : Семейство - Chlamydiaceae
Род - Chlamydia
ЭТ - внеклеточная инфекционная частица (0,2-0,4 мкм), содержит компактный нуклеоид, рибосомы, жесткую клеточную стенку. ЭТ проникает в чувствительную клетку путем эндоцитоза, вокруг него образуется вакуоль. Внутри вакуоли ЭТ разбухает, приобретает сетчатую структуру, увеличивается до 0,5-1,5 мкм и превращается в РТ.
РТ внутри вакуоли многократно делится путем образование поперечных перегородок. Вакуоль заполняется микро-колониями хламидий, содержащих большое количество РТ в процессе деления, промежуточные тельца и ЭТ. Вакуоль превращается во внутриклеточное включение, покрытое оболочкой - хламидой, расположенное в цитоплазме клетки-хозяина. Выход хламидий из клетки - через неповрежденную мембрану или при гибели клетки. Освободившиеся ЭТ внедряются в другие здоровые клетки, где цикл развития повторяется.
Изучают хламидии в живом состоянии, в фазово-контрастном микроскопе и окрашивают методом Романовского-Гимзы (ЭТ - розовые, РТ - сине-голубые).
Патогенны: Chlamydia trachomatis (трахома и урогенитальные инфекции), Chlamydia pneumoniae (респираторные инфекции), Chlamydia psittaci (орнитоз).
18. Спирохеты : таксономия, биологические свойства, ультраструктура клетки, цисты. Методы изучения спирохет нативных и окрашенных препаратов. Роль спирохет в инфекционной патологии человека.
Семейство – Spirochaetaceae
Спирохеты - тонкие нитевидные, спирально извитые микроорганизмы, обладающие активной подвижностью. Относятся к грамотрицательным прокариотам. Клеточная стенка эластичная, что позволяет им совершать колебательные, вращательные и сгибательные движения.
Двигательный аппарат представляет собой фибриллярный тяж, состоящий из 2х пучков фибрилл, расположенных субтерминально на обоих концах клетки. Фибриллы пролегают в клеточной стенке, обвивая цитоплазматический цилиндр (протопласт). В середине клетки фибриллы перекрывают друг друга. Фибриллы состоят из белка флагеллина.
Спирохеты изучают в нативных препаратах, используя темно-польную микроскопию для выявления их форм и подвижности. Их Ультраструктуру изучают с помощью электронной микроскопии. Для изучения спирохет в окрашенном состоянии применяют: метод Романовского-Гимзы (боррелии в сине-фиолетовый, трепонемы в бледно-розовый, лептоспиры в красно-розовый), метод серебрения по Морозову (спирохеты имеют вид тесно-коричневых спиралей на светло-желтом фоне препарате),негативный способ Бурри (тушь не проникает тела микробов,на темном фоне белые контуры спирохет)
существенную роль в инфекционной патологии человека играют роды Treponema, Borrelia и Leptospira. Treponema pallidum - возбудитель сифилиса, Borrelia recurrentis - возбудитель возвратного тифа, Leptospira interrogans является возбудителем лептоспироза
19. Микроскопические грибы : морфология, ультраструктура. Размножение плесневых и дрожжевых грибов. Методы изучения. Роль в инфекционной патологии человека.
Протопласты (содержимое клетки, заключенное в клеточную стенку) клетки грибов содержат ядро с ядрышком, митохондрии, лизосомы, эндоплазматический ретикулум, рибосомы, фагосомы, вакуоли и др. Снаружи протопласты покрыты ЦПМ с высоким содержанием стеролов (главным образом эргостерола) и плотной клеточной стенкой,в состав которой входят хитин, целлюлоза, глюкуроновая кислота, глюканы, различные углеводы, липиды, белки, пигменты.
По морфологическим особенностям грибы подразделяются на группы: плесневые грибы и дрожжеподобные грибы
Плесневые грибы образуют мицелий (тело гриба), который состоит из переплетенных гифов. На питательной среде плесневые грибы образуют субстратный мицелий, который прорастает в нее, извлекая из среды все необходимые для роста и размножения вещества, и воздушный мицелий,на котором созревают неполовые споры,с помощью которых грибы размножаются. Бесполовой путь у плесневых грибов характеризуется образованием большого количества экзоспор или эндоспор. Многие грибы могут размножаться и половыми спорами(половым путем).
Дрожжевые грибы размножаются почкованием.
Морфологию грибов изучают в нативных препаратах "раздавленная капля" в затемненном поле зрения, фазово-контрастном и люминесцентном микроскопе и с помощью окраски простым методом, по Граму, Цилю-Нильсену,Нейссеру
Заболевания вызываемые микроскопическими грибами - микозы.Грибковое заболевание Кандидоз - вызывается Candida albicans
РАЗДЕЛ ФИЗИОЛОГИЯ.
Покраска металла – это довольно распространенный вид работ. За счет него поверхность приобретает надежную защиту и отличный визуальный эффект. Но для получения идеального результата окрашивание должно проводиться с соблюдением всех технологических нюансов. Они включают в себя правильный выбор материала, подготовку основания и нанесение красящего состава.
Подходящая продукция – залог успеха, поэтому при работе с металлическими основаниями именно данному фактору отводится важнейшая роль.
Универсальные материалы
Покраска может осуществляться следующими распространенными видами продукции:
Эти растворы считаются классическими и применяются повсеместно. Отдельно стоит порошковый метод окраски. Он сложен тем, что требует задействования специального оборудования и инструментов.
На заметку! При выборе подходящего варианта также оценивается расход, уровень токсичности, необходимая степень подготовки, долговечность, специальные свойства и стоимость.
Специализированые варианты
Для обеспечения надежности и долговечности в некоторых случаях требуются специальные материалы:
Существуют и другие виды красящих смесей – лак и эмаль, которые используются при обработке печей и прочих подобных изделий. Они относятся к термостойким материалам.
Технология окраски металла
Технологический процесс разделяется на несколько последовательных этапов, что позволяет добиться наилучших результатов.
Инструмент и материалы
Прежде всего требуется приготовить необходимые инструменты и материалы:
- Красящий состав.
- При обработке вручную листовых изделий применяется валик, для сложных или труднодоступных участков – кисточки, при механизированном способе – краскопульт. Если красить необходимо большую площадь, то ручным инструментом это сделать очень тяжело. Но нужно учитывать, что пульверизатором хорошо наносится только состав определенной вязкости.
- Смесь для грунтования. При работе с обычным основанием подойдет простой раствор для металла. Если изделие изготовлено из цветных материалов, то подбирается соответствующий грунт. В случае присутствия ржавчины потребуется грунт-преобразователь. Его особенность в том, что он вступает во взаимодействие с поврежденной структурой и превращает ее в защитный слой.
- Отдельная емкость для краски. Это может быть тара для валика или кисточки, чтобы упростить процедуру.
Внимание! Обязательно следует ознакомиться с инструкцией, которую прилагает каждый производитель. Особое внимание уделяется условиям выполнения работ. Так, минимально допустимой температурой является +5 градусов при влажности не выше 80%.
Подготовка металлических поверхностей под окраску
Этот процесс требует ответственного подхода, любые недочеты будут заметны. Исправить появившиеся из-за плохой подготовки проблемы крайне затруднительно, а порой невозможно.
Алгоритм действий:
Как правильно покрасить металлические изделия
Методы покраски зависят от инструментов, допускается комбинирование приспособлений.
Валиком удобно работать на больших и ровных поверхностях. Технология следующая:
- Состав предварительно разводится, в качестве растворителя выбирается подходящее вещество. Такая процедура нужна для более легкого распределения.
- Краска переливается в удобную емкость. Валик должен погружаться широкой частью, а не боком. Инструмент должен быть предельно надежным и не оставлять после себя ворсинок.
- Процесс начинается с выбранного участка. Лучше двигаться от одного края к другому, это позволит избежать видимых переходов.
- Смоченный инструмент устанавливается на поверхность, после чего начинается раскатка. Первые движения идут в вертикальном направлении: снизу вверх и обратно. Сразу захватывается участок в два или три раза больше ширины валика. Надавливание должно быть минимальным с постепенным возрастанием.
- После того как состав будет перенесен на поверхность, движения сменяются на горизонтальные.
Залог успешной работы – планомерное распределение материала без слишком толстых участков. Количество наносимых слоев варьируется от 2 до 4.
Важно! Каждый следующий слой наносится только после тщательной просушки предыдущего. При этом искусственное ускорение процесса запрещено.
Покраска кистью
Это довольно монотонное занятие, которое проводится на сложных или рельефных частях изделия.
Если смесь слишком вязкая, то ее немного разбавляют. Окунать щетину нужно не полностью, а на 1/3, это позволит избежать появления потеков, излишки стряхивают постукиванием о край емкости. Движения должны быть однонаправленными. Первыми мазками краска укладывается на покрытие, последующими – растирается. Количество наносимых слоев зависит от типа поверхности.
Сложные конструкции прокрашиваются тонкими кисточками, при этом набирается минимальное количество раствора. Это позволит исключить появление застывших капель.
Применение краскопульта
Поскольку впитываемость металла не очень высока, использование пульверизатора предполагает наличие опыта. Если его нет, необходимо потренироваться.
Нанесение краски с помощью краскопульта
- Распыление происходит без остановок. Первые движения должны быть плавными и медленными. Слой укладывается параллельно.
- После начального покрытия процесс ускоряется, одно и то же место обрабатывается в разных направлениях. Важно соблюдать одинаковую дистанцию.
Этот прибор значительно облегчает работу своими руками. При определенной сноровке покрасить удается даже сложные участки.
На заметку! Если требуется получить поверхность с эффектом старины, то прибегают к различным методам. Наиболее простыми считаются окрашивание под бронзу и лессировка.
Порошковое окрашивание
В домашних условиях такой процесс провести очень трудно, поскольку необходима покрасочная камера и специальные инструменты. Но достоинство такого способа в том, что после нанесения краски изделие подвергается тепловой обработке, а это делает покрытие более надежным и долговечным.
Окрашивание волос включает в себя следующие этапы Гутыря Л.Г. Парикмахерское мастерство - М., 2009:
- - подбор красителя;
- - тест на восприимчивость красителя;
- - подготовка к окрашиванию;
- - нанесение краски;
- - выдержка;
- - смывание краски.
Подбор красителя.
Чтобы определить свой тип волос, необходимо приподнять пряди и рассмотреть их при дневном освещении, поскольку в общей массе волосы кажутся более темными.
После химической завивки обычно применяют тонирующие препараты. Они не только делают цвет более ярким, но и улучшают структуру волос.
При окрашивании в натуральный цвет следует учитывать ряд правил: волосы у корней всегда должны быть темнее, чем на концах, волосы спереди необходимо сделать светлее, чем сзади, а верхние - чуть светлее нижних.
Тест на восприимчивость препарата.
Если есть склонность к аллергии, необходимо провести тест на восприимчивость к данному типу красителя следующим образом:
- - небольшое количество препарата наносят на кожу за ухом;
- - краситель оставляют на 24 часа;
- - если кожа покраснела или появилось раздражение, значит, от препарата следует отказаться.
Подготовка к окрашиванию.
Перед окрашиванием голову не следует мыть, чтобы сохранилась жировая прослойка, которая предохраняет волосы и кожу головы. Очень грязные волосы следует вымыть один раз шампунем без бальзама. Остатки средств для укладки лучше удалить с помощью расчесывания.
Правила нанесения краски.
Правило 1. Кожа лица.
Кожу по краям волос смазывают жирным кремом, маслом или вазелином.
Правило 2. Перчатки.
При окрашивании используют специальные перчатки, поскольку краска неблагоприятно воздействует на кожу рук и ногти.
Правило 3. Инструменты.
Мисочки для разведения краски, а также инструменты для нанесения препарата, должны быть пластмассовые или керамическими, поскольку при реакции красителя с металлом образуются соединения, которые отрицательно влияют на волосы и качество краски.
Правило 4. Смешивание краски.
Краску смешивают непосредственно перед ее нанесением.
Правило 5. Нанесение краски.
Волосы деля на 4 зоны, проводя через макушку два перпендикулярных пробора. Краситель сначала наносят по проборам, а затем на затылочную зону, так как она холоднее, и окраска будет происходить менее интенсивно. На виски и волосы надо лбом, краску наносят в последнюю очередь, поскольку там самые тонкие волосы и они быстро ее воспринимают. Если какие-то пряди необходимо сделать светлее, чем другие волосы, сначала наносить краску нужно именно на них.
Правило 6. Нанесение красителя красного тона.
Если производится окраска интенсивными красными тонами, краску наносят на волосы по всей их длине, отступив от корней на 2-3 см. После того как волосы пропитаются, краситель наносят на корни и на кончики.
Правило 7. Время нанесения.
Наносить краску нужно точно и быстро, чтобы цвет получился равномерным. Вся процедура нанесения не должна превышать 10-15 минут.
Правило 8. Толщина прядей.
Чем гуще и толще волосы, тем тоньше должны быть пряди, на которые наносится краска. Тогда она сможет пропитать каждый волос.
Правило 9. Повторное окрашивание.
Если окрашивание производится повторно, смесь следует наносить точно, чтобы она не попала на ранее окрашенные волосы и они не пострадали.
Правило 10. Резиновая шапочка.
На голове после нанесения краски должен образоваться своего рода панцирь, который создаст парниковый эффект и будет препятствовать выходу свободного кислорода. Для этого на голову надевают специальную полиэтиленовую или резиновую шапочку.
Выдержка.
Нужно соблюдать точное время выдержки. Оно отсчитывается после нанесения красителя.
При постельном тонировании - 15 минут.
При нормальной окраске тон в тон или на тон светлее (темнее) - 30-50 минут.
При сильном осветлении - 50 минут, иначе краситель не сможет проявиться полностью на волосах.
Смывание краски.
Перед смыванием красители необходимо проверить, хорошо ли прокрасились волосы. Для этого обушком расчески отодвигают краску на корнях и концах волос и сравнивают их.
Когда достигается нужный цвет, необходимо провести эмульгацию. Для этого на волосы наносят небольшое количество теплой воды, слегка вспенивают ее и распределяют по всей поверхности головы, производя массирующие движения по линии роста волос.
После этого промывают волосы теплой водой, затем шампунем, обрабатывают нейтрализующим бальзамом, чтобы удалить остатки краски.
Изменять цвет волос люди научились еще несколько тысячелетий назад. В те времена процедура окрашивания была довольно длительной и утомительной и проводилась в течение нескольких дней. Сейчас же кардинально изменить цвет шевелюры можно за каких-то час-полтора. И это не все достижения современного окрашивания волос. Технология окрашивания на сегодняшний день настолько продвинута, что вы можете приобрести два, три и даже больше оттенка, не нанося огромного вреду красоте и здоровью шевелюры.
Выбор средств
Если вы хотите скрыть седину или радикально изменить цвет прически, то вам не обойтись без окрашивания волос. Технология окрашивания, а также выбор средств при этом во многом зависят от поставленной цели. По своему воздействию все красящие препараты делятся на три группы:
- Подкрашивающие. К ним относятся различные пенки, бальзамы, шампуни, растительные настойки и отвары. Такие средства используются для временного изменения цвет волос. Они придают нужный оттенок, при этом нанося минимальный урон, ведь в их составе отсутствуют различные агрессивные вещества. Увы, полученный результат держится недолго и исчезает спустя 5-8 процедур мытья головы. Технология окрашивания волос хной, которая также относится к этой группе, позволяет продлить эффект несколько дольше. Кроме того, подобная процедура придает блеск и здоровый вид локонам.
- Полустойкие красители. К таким средствам относят препараты, позволяющие сделать цвет прядей на 2-3 тона темнее или светлее. Допускаются к использованию на ломких и хрупких волосах, так как в их составе не очень много окислителя.
- Стойкие краски. В составе подобных средств присутствует значительная доля перекиси водорода. Это вещество раскрывает чешуйки кератинового слоя каждого волоска, удаляет натуральный красящий пигмент и меняет его на искусственный. При этом локоны частично повреждаются и теряют влагу. После процедуры окрашивания необходимо использовать специальный бальзам, который помогает вернуть чешуйки на место. Но полностью восстановить волосы не удастся. Локоны, на которых применялась стойкая краска, требуют к себе постоянного внимания и заботы.
Смена цвета - довольно серьезный шаг, поэтому очень важно подобрать наиболее щадящие группы красителей и основные технологии окрашивания волос.
Классическое
Покраска шевелюры одним цветом по всей длине называется традиционным окрашиванием волос. Технология окрашивания в этом случае довольно проста, и процедуру можно выполнить самостоятельно в домашних условиях без посещения салонов красоты. Заключается она в следующем:
- Подбирается соответствующий краситель.
- Проводится кожный тест с малым количеством средства.
- Если нет аллергических реакций, то краситель разводится согласно инструкции.
- Локоны окрашиваются прядь за прядью по всей длине начиная от макушки.
- Краситель удерживается на волосах в течение времени, указанного на упаковке.
- Средство обильно смывается водой.
- Наносится лечащий бальзам, который нужно подержать на волосах в течение 2-3 минут. После этого локоны хорошо промываются водой.
Подобный метод позволяет изменить цвет прически на несколько тонов. Результат процедуры во многом зависит от натурального оттенка локонов. Дело в том, что классическая методика - это не особо сложное окрашивание волос, при котором происходит предварительное обесцвечивание прядей, а обычная замена одного цвета на более темный или светлый. При этом поменять оттенок можно максимум на 2-3 тона, конечно, если вы не блондинка от природы. В остальных случаях для кардинальной смены цвета прядей потребуется процедура, речь о которой пойдет в следующем блоке.
Осветление, или блондирование
Под этой процедурой подразумевают обесцвечивание локонов, при котором окислители полностью удаляют красящий пигмент с каждого волоса. Блондирование может выступать самостоятельным методом смены оттенка прядей на более светлые тона или сопровождать классическое окрашивание волос. Технология окрашивания такая же, как и при традиционной смене цвета локонов.
Состав наносится на волосы и оставляется на нужное время. В процессе процедуры происходит полное удаление натурального пигмента, что делает волосы намного светлей. Блондирование относится к довольно вредным методам, ведь оно наносит ощутимый вред волосам. В дальнейшем они нуждаются в особенном уходе и защите.
Мелирование
На сегодняшний день эта процедура приобрела статус одной из наиболее популярных техник окрашивания волос. Мелирование предполагает плавное или контрастное изменение цвета прядей. Так как при процедуре красящими средствами обрабатываются некоторые локоны, то она считается более щадящей.
Существует 4 типа мелирования:
- Классическое. При подобной процедуре осветляются некоторые прядки, причем их толщина и ширина может меняться. Чтобы придать естественность локонам, второй цвет отличается от естественного на 2-3 тона. И наоборот, чтобы подчеркнуть контраст между прядями, некоторые из них значительно обесцвечиваются. Второй вариант довольно радикален и наносит серьезный вред локонам. Поэтому при сухих и ломких волосах проводить его не рекомендуется.
- Частое. При таком мелировании окрашиваются верхние пряди. Очень эффектно смотрится на темных коротких волосах.
- Обратное. При этой процедуре происходит окрашивание светлых локонов в более темные тона.
Методика мелирования имеет и несколько других разновидностей, и самая популярная из них - это окрашивание волос технологией «Блики». При подобной процедуре не используется фольга, а мастер наносит обесцвечивающую краску кистью, что создает видимость солнечных зайчиков на волосах. Выглядит подобный рисунок очень эффектно и интересно, особенно на темных длинных прядях.
Колорирование
Под такой технологией подразумевают окрашивание прядей в несколько тонов, близких к естественному цвету волос, или, наоборот, резко контрастных. Основное преимущество данной процедуры - это возможность применения ее на любых локонах: темных, светлых, седых, мелированных. Колорирование придает объема прическе и создает яркий незабываемый образ.
Новые технологии окрашивания волос. Омбре
Весьма популярная техника, при которой комбинируется калифорнийское мелирование и вертикальное колорирование. Для волос подбираются основные оттенки - обычно их не больше трех. После чего пряди окрашиваются таким образом, чтобы получился плавный переход от темных корней до светлых кончиков. Омбре - довольно сложное окрашивание волос, поэтому правильно выполнить его может только стилист с большим опытом. В ином случае прическа превратится в пестрый пучок.
Несмотря на то что техника омбре появилась относительно недавно, принято различать несколько видов подобного окрашивания:
- Классическое. В большинстве случаев корни волос остаются нетронутыми или их подкрашивают в более темный цвет. Средняя часть локонов осветляется на 4 тона, кончики - на 8. Для этого типа омбре выбираются цвета, приближенные к естественной палитре.
- Обратное. Такой вид окрашивания эффектно смотрится на волосах средней и короткой длины. В отличие от классического кончики получаются темными, а корни - светлыми.
- Цветное. В этом случае подбираются яркие контрастные оттенки.
- Резкое. Вместо плавного перехода одного цвета в другой создается резкая граница между корнями, серединой и кончиками.
Технология окрашивания омбре на темные волосы не относится к щадящим процедурам, ведь для того, чтобы создать переходы, потребуется радикальное осветление, а также применение стойких красок. Нельзя сказать, что эта методика безопасна для светлых волос. Хотя в этом случае не нужно использовать осветляющие препараты, применения стойких красителей все же не избежать.
Шатуш
Эта методика является, по сути, необычным мелированием. Технология выполнения окрашивания волос в этом случае заключается в следующем: выбираются пряди в хаотичном порядке. После чего они осветляются, но не до корней. Подобная методика создает впечатление немного выгоревших на солнце волос. Процедура занимает не более 40 минут и наносит минимальный вред локонам. Технологией шатуш можно окрашивать волосы любой длины.
Технология окрашивания волос балаяж
Модная разновидность мелирования, при которой осветляют и красят только кончики прядей. Иногда используется несколько вариантов цветов и переход между ними может быть как плавным, так и контрастным. В первом случае красители подбирают под отличающиеся от естественного цвета на 2-3 тона. Во втором же кончики осветляются и красятся в довольно интенсивный и даже экзотический цвет. Особенной популярностью пользуется сейчас «прическа русалки» с зелеными, розовыми и фиолетовыми прядями.
3D-окрашивание
Одна из наиболее популярных разновидностей колорирования. Благодаря этой технологии можно придать значительный визуальный объем прическе. 3D-окрашивание подходит как светловолосым, так и темноволосым девушкам. В идеале, прежде чем выполняется эта технология, производится компьютерное моделирование будущей прически. Но большинство салонов, увы, не имеют нужного оборудования. Так что приходится полагаться на мастерство и безупречный вкус стилиста.
В 3D-окрашивании применяют не более 3 оттенков, при этом один из них основной, а два вспомогательных. Цвета подбирают максимально подходящие друг к другу, а также к естественному тону волос. Контрастные оттенки и резкие переходы недопустимы при этом виде окрашивания волос. Технология окрашивания заключается в следующем:
- На пряди затылочной части головы от уха до уха наносится основная, более темная краска.
- Корневая часть остальных волос покрывается тем же тоном.
- Локоны делятся от затылка ко лбу на небольшие пряди с шириной в 4-5 см.
- Их окрашивают двумя дополнительными цветами по всей длине, чередуя оттенки между собой.
- Граница между прядями не должна бросаться в глаза, поэтому волосы вновь делятся на пряди и после чего повторно окрашиваются.
После прохождения процедуры локоны выглядят ярко и естественно, при этом эффект сохраняется достаточно долго. Ведь отрастающие кончики совершенно не портят всю картину. Поэтому нет необходимости повторять 3D-окрашивание чаще, чем раз в месяц.
Иллюминирование волос
При этом методе окрашивания используется специальная устойчивая краска. В ней не нет аммиака и других окислителей, и она не наносит вред локонам. Более того, краска придает блеск и здоровый вид даже поврежденным волосам, а также добавляет объема прическе. Средство очень устойчиво и не смывается более 2 месяцев. После этого срока процедуру рекомендуется повторить. Единственное противопоказание для проведения иллюминирования - густые волосы и жирная кожа головы. В этом случае результат от применения краски выглядит очень непривлекательно.
Трафаретное окрашивание
Довольно смелая технология окрашивания. Во время процедуры красители наносят на локоны с использованием различных трафаретов. В итоге на волосах остаются различные фигуры, геометрические узоры, животные принты и цветочные орнаменты. В общем, любой рисунок, на который хватит фантазии у стилиста.
